抽象的
肥大细胞（MC） - 嗜碱性相关的炎症性疾病对社会具有相当大的负担。尽管护理标准治疗，重要的部分患者有症状。用来降低血清胆固醇的e乐彩下载类药物具有免疫调节活动。我们在IgE介导的MC和嗜碱性激活中测试了体外和体内效果。氟伐e乐彩下载显示出测试的六种e乐彩下载类药物最显着的抑制作用，抑制了小鼠MCS和嗜碱性粒细胞中的IgE诱导的细胞因子分泌。氟伐e乐彩下载的培养物由甲氧酰酸或甲苯基酰基焦磷酸酶反转，并被Geranylgeranyl转移酶抑制模仿。氟伐e乐彩下载有选择地抑制了关键的FcεRI信号通路，包括Akt和Erk。虽然来自C57BL / 6J小鼠菌株的MCS和嗜碱粒细胞对氟伐e乐彩下载的敏感性，但是来自129 / SVIMJ小鼠的那些是完全抗性的。抗性与氟伐e乐彩下载诱导的沙特蛋白靶HMG-COA还原酶诱导的抗性相关。来自八个捐助者的人类MC文化显示出广泛的氟伐e乐彩下载反应性。这些数据表明，氟伐e乐彩下载是IgE介导的MC活化的有效抑制剂，至少部分地通过HMG-CoA还原酶的下游封闭的小壬基脂质生成。重要的是，考虑到e乐彩下载类药物用于治疗MC相关疾病的用途，需要纳入遗传背景效应，这可以产生耐药性。
介绍
e乐彩下载类药物广泛用于治疗高胆固醇血症和心血管疾病（CVD）（1）。这些药物通过竞争性地抑制3-羟基-3-甲基戊族COA还原酶（HMGCR）酶，导致胆固醇还原（1）。汀类蛋白结构影响其吸收，代谢，分布和排出的能力（2）。e乐彩下载汀还表现出抗氧化剂，抗炎症，抗血栓形成和免疫调节功能（3, 4）。在兔动脉粥样硬化模型中，阿托伐e乐彩下载显着降低新内膜炎炎症和巨噬细胞浸润（5）。类似地，已显示洛伐e乐彩下载降低单核细胞和CD11b依赖性粘合性的CD11b表面表达，以固定内皮（6 ）。
e乐彩下载类药物的抗炎作用被认为是免受CVD保护的关键。事实上，几种临床试验表明了对CVD的许多非脂质降低的e乐彩下载类药物益处（在REF中审查。 7）。这些效果归因于降低是胆固醇合成途径的一部分的异戊二烯的产生，并且参与改性细胞信号传导蛋白。特别地，包括小GTP酶家族的甲苯化和法润珥蛋白，如RA，RAC和RHO，负责控制多个细胞信号传导途径。因此，e乐彩下载类药物施加了抗脂病效应并不令人惊讶。
已经表明，e乐彩下载类药物可以抑制来自巨噬细胞的TNF和IL-1β（8）。氟伐e乐彩下载，一种合成亲脂性家庭成员，抑制大鼠细胞系中的肥大细胞（MC）脱粒（2），但尚未阐明机制。此外，人类和体内模型尚未彻底评估。我们的数据表明，e乐彩下载类药物抑制了体外和体内介导的全系列FcεRI介导的MC信号，对小鼠嗜碱性粒细胞和原代人MCS具有一致的影响。抑制似乎施加在甘油酰基脂质产生的水平。有趣的是，e乐彩下载类药物对遗传背景非常敏感，可能是因为药物诱导的HMGCR表达的控制。我们的数据支持考虑e乐彩下载类药物作为抑制炎症疾病的手段，具有遗传背景可以确定药物功效。
材料和方法
细胞因子和试剂
动物
C57BL / 6J和129 / SVIMJ小鼠来自杰克逊实验室（Bar Harbour，Me），并至少使用10周，弗吉尼亚联邦大学的批准，批准了机构动物护理和使用委员会。
小鼠MC和嗜碱性粒细胞文化
如前所述培养小鼠骨髓衍生的MCS（BMMC）（9+
人体皮肤mc文化
涉及人类组织的所有协议由人类研究南卡罗来纳大学内部审查委员会批准。从国家癌症研究所的合作人体组织网络获得外科皮肤样品。如前所述制备和培养皮肤MCS（10）并且在8-16周后使用，此时纯度基本上100％MCS，如甲苯胺蓝染色所测定。
IgE介导的激活
用DNP特异性小鼠IgE（用于人MC为1.0μg/ mL的1.0μg/ mL，对人MCS或BMMC进行敏化，然后洗涤并重新悬浮1×106
流动细胞术分析
通过标准流式细胞术在BD FacScalibur上测量表面C-kit和FcεRi表达。为了检测细胞内细胞因子，我们如前所述染色细胞（9）。嗜碱性粒细胞在固定前也用FITC-抗CD49B染色。
脱粒测定
细胞镀以1×106如前所述，用氟伐e乐彩下载或DMSO（载体1：5000）处理24h±0.5μg/ mL的CRPMI中，在RPMI 1640中洗涤两次，并在RPMI 1640中洗涤两次，并被激活±DNP-HSA 1小时在用CD63染色之前，然后进行流式细胞术分析。
迁移试验
如前所述，分析迁移（9），使用8μM聚碳酸酯24孔Transwell插入康宁。
HMG-COA还原酶定量PCR
BMCC. s培养±40μm氟伐e乐彩下载5小时。用Trizol Reagent（Life Technologies，Grand Island，Ny）提取RNA。使用寡核苷酸脱氧肾上腺素引物使用替代III逆转录酶（Vertigen，Grand Island，NY）合成cDNA。使用相对Livak方法使用Biorad CFX96触摸实时PCR检测系统（Hercules，CA）和Sybr绿色检测进行定量PCR分析。引物包括：HMGCR引物Q.hmgcr前进：5'cctgtaactcaggggtcaagatgat-3'和q.hmgcr反向：5'ccagcgactgtgagcatgaa-3'或β-肌动蛋白小鼠β-肌动蛋白前进：5'gatgacgatatcgctgcgc-3'，小鼠β-actin反向：5'CTCGTCACCACATAGGAGTC-3'（管家基因）引物（由生命技术，大岛，NY的Invitrogen）。熔化曲线分析在50℃至95℃之间进行。
胆固醇的定量测量
通过液相色谱串联质谱法通过耦合到Qtrap 6500质量分析仪（AB SCIEX，Framingham，MA）的Shimadzu Nexera Uplc型分析胆固醇水平。使用如前所述的改性的肠和染色方法从细胞沉淀中从细胞颗粒中提取脂质（11, 12 ）。
Western印迹分析
如前所述进行蛋白质印迹（9）。使用吉尔托卫生犬CLX红外成像系统（林肯，NE）可视化和量化斑点。
被动系统性过敏反应
将小鼠施用200μLPBS，含有1mg FlyVastatin或通过I.P的等同稀释的DMSO。注射，然后含有50μg小鼠IgE抗DNP的200μLPBS。第二天，在通过I.P给予DNP-HSA（50μg）之前，再次施用含有1mg Flyvastatin的200μLPBS，或DMSO 1 H。注射。在一些实验中，注射了8毫克组胺代替Ag。使用直肠微探针（物理仪器）测量每只小鼠的核心体温。将小鼠安乐死，并通过心脏穿刺收集血液以分析血浆。
统计分析
这 p 使用GraphPad Prism软件计算值，通过配对或未配对的双尾学生计算 t 测试适当。这 p values <0.05被认为是统计学意义。除非另有说明，否则结果表示为一式三份进行的至少三个独立实验的平均值±SEM。在所有图中，*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001.
结果
e乐彩下载类药物通过小鼠MCS抑制IgE介导的细胞因子产生
e乐彩下载汀在RBL-2H3细胞中改变异戊二烯的产生和脱粒（13）。我们测试了几个Statin家族成员，以确定它们对IgE激活（XL）主MCS的影响。在Ag诱导的活化之前将C57BL / 6J BMMC用于24小时，通常显示出在Atorvastatin和Pravastatin治疗外，除IL-6，TNF和IL-13产生下降（图。1A）。氟伐e乐彩下载的反应趋于最大的程度，因此我们将我们的研究重点是我们对这种药物的研究。
图1。
e乐彩下载类药物在小鼠MCS中抑制IgE介导的细胞因子产生。 （A）将C57BL / 6J BMCS用DMSO或10μM所示的e乐彩下载蛋白培养24小时，然后如所述激活。通过ELISA测定培养上清液中的IL-6，TNF和IL-13水平。 （B）在（a）中，用指示剂浓度培养BMMCs的氟伐e乐彩下载培养。 （C）用10μM氟伐e乐彩下载在（a）中用10μm氟伐e乐彩下载处理BMMC，以在Ag介导的6小时内进行指示的时间。 （D) BMMCs were cultured with 10 μM氟伐e乐彩下载如（a）中，并通过ELISA测试IL-10存在的培养上清液。数据是手段±五（a）和三（b–D) independent experiments done in triplicate and analyzed by unpaired t 测试，比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。对于每个独立的实验， n = 3. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001.
通过评估IgE诱导的IL-6，TNF和IL-13分泌来建立氟伐e乐彩下载介导的抑制的时间和剂量依赖性。总共10μm的氟伐e乐彩下载产生最大的抑制，抑制细胞因子产生≥50％。 IC.50 对于这种效果是〜2.5-5μm（图。1B）。 24小时孵育产生显着抑制，细胞活力没有变化（图1C.）。相比之下，72小时治疗提供了最大的抑制，但细胞活力降低（数据未显示）;因此，我们使用了24小时的时间点进行进一步研究。最后，有趣的是要注意，氟伐e乐彩下载对IL-10的产生没有影响，这是一般是抗炎的细胞因子（图。1D）。这种来自对促炎细胞因子的影响的分歧表明FCεRI信号传导如何改变一些特异性。
氟伐e乐彩下载效应通过阻滞异戊二烯脂质介导
氟伐e乐彩下载通过阻断HMGCR，抑制甲戊酸（MVA）的产生（3, 14–16）。评估目标特异性，我们试图扭转氟伐e乐彩下载与MVA的影响。如图所示 图2A，MVA在氟伐e乐彩下载存在下恢复IgE介导的细胞因子产生，表明由于HMGCR阻断，药物效应实际上是。
图2。
氟伐e乐彩下载介导的抑制与异戊二烯生物合成相关。 （A）如图所示，在DMSO或10μM氟虫蛋白±1000mM MVA存在下培养IgE涂布的C57BL / 6J BMMC。然后用Ag激活细胞16小时，并通过ELISA分析培养上清液。单独的MVA没有改变细胞因子生产（数据未显示）。 （B) BMMCs were cultured for 24 h with IgE plus the indicated inhibitors (20 μm）或fluvastatin（10μM), then activated for 16 h with Ag。 ELISA分析了培养上清液。 （C) BMMCs were cultured for 24 h with IgE in the presence of DMSO, fluvastatin (10 μM) ±所示的法呢基，或焦磷酸甲酸酯（20μM) before Ag activation for 16 h. Culture supernatants were assayed by ELISA. (D在Ag活化16小时之前，用IgE加DMSO或所示的ZA培养24小时，培养BMMCs或浓度。 ELISA分析了培养上清液。数据是三（a，b，d）的±sem或四（c）独立实验，一式三份完成并通过未配对分析 t 测试比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。对于每个独立的实验， n = 3. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001.
MVA. 新陈代谢导致胆固醇的生产，也产生了法牛糖磷酸盐和焦磷酸焦磷酸酯，异戊二烯脂质的前体。这些对于蛋白质旺苯至关重要，包括对小GTP酶如RAS，RAC和RHO的修饰。为了确定戊酰化的重要性，我们使用了化合物GGTI-286和FPTIII，分别的甲苯基烷基化和法牛糖的选择性抑制剂。 GGTI-286治疗24小时模仿氟伐e乐彩下载的影响（ 图。2B）。用氟伐e乐彩下载加GGTI-286治疗抑制细胞因子的产生多于单独的化合物。相比之下，FPTIII治疗提供很少或没有抑制（图。2B ）。
为了用这些抑制剂确认我们的发现，我们试图通过恢复异戊二烯脂质来反转氟伐e乐彩下载介导的抑制作用。在存在或不存在巨氧基氧基磷酸盐或焦氧铝的存在或不存在下，用氟伐e乐彩下载治疗BMMC。如图所示 图2C.与氟伐e乐彩下载处理的细胞相比，焦烷基焦磷酸焦磷酸酯部分地振动的IgE介导的细胞因子产生。相比之下，法呢基焦磷酸盐几乎没有效果。
虽然异戊二烯障碍似乎对氟伐e乐彩下载的影响很重要，但胆固醇耗尽也可能是至关重要的。为了测试这一点，我们使用Squalene合酶抑制剂Za，其阻断了异戊二烯醛产生下游的胆固醇合成。 Za治疗降低了BMMC胆固醇水平59％，类似于氟伐e乐彩下载（数据未显示）的影响，但对IgE介导的细胞因子产生没有影响（图2D）。总的来说，这些数据表明，氟伐e乐彩下载对Ag诱导的细胞因子产生的影响主要是由于FCεRI信号传导中涉及的大壬基酰基化事件的减少。
氟伐e乐彩下载效应可以通过遗传背景改变
为了确定遗传背景是否改变氟伐e乐彩下载的反应性，我们将BMMC与C57BL / 6J和129 / SVIMJ小鼠进行比较，其具有许多多态变化。如图所示 图3A，129 / Svimj BMMCs以高达40μm的浓度对氟伐e乐彩下载抗抗抗抗性。事实上，129 / svimj BMMCs对辛伐e乐彩下载，普伐e乐彩下载抵抗，部分到阿托伐e乐彩下载（补充图1）。为了树立这些差异不是由于它们的体外分化，我们使用腹膜MCS进行氟伐e乐彩下载反应，从而产生了类似的结果（图3B.）。我们还测试了从BALB / C和A / J小鼠培养的BMMC，这两者也抵抗氟伐e乐彩下载效应（补充图2）。这些数据支持遗传背景可以产生耐药性的假设。
图3。
129 / SVIMJ小鼠MCS对FluVastatIN具有抵抗力。 （A）C57BL / 6J或129 / SVIMJ BMCS在指定的氟伐e乐彩下载的浓度下培养并如上所述活化 图。1A。 ELISA分析了培养上清液。 （B）用DMSO或10μM氟伐e乐彩下载培养来自所指示的小鼠菌株的纯化的腹膜MCs，然后用Ag活化。通过ELISA评估培养上清液。 （C）从所示菌株中的BMCS如上所述培养 图。1A 并通过流式细胞术染色去检测表面CD63之前用Ag活化1小时。 （D) BMMCs from the indicated strains were cultured with DMSO (−）或氟伐e乐彩下载（10μM) for 24 h, then tested for migration toward an SCF gradient as described in 材料和方法。显示的所有数据至少是三个实验。数据是三次独立实验的±SEM，其三份完成并通过未配对分析 t 测试比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。对于每个独立的实验， n = 3.（b）显示三份完成三种独立实验中的一个代表。 ***p < 0.001, ****p < 0.0001.
我们进一步表明，氟伐e乐彩下载抑制了其他MC功能，在129 / SVIMJ MCS中也不存在的效果。通过膜状蛋白CD63的膜表达判断，FCεRI诱导的脱粒，通过氟伐e乐彩下载在C57BL / 6J BMMC中选择性地抑制（图3C.）。同样，氟伐e乐彩下载减少了SCF介导的C57BL / 6J的迁移，但不是129 / SVIMJ BMMC（图。3D ）。
氟伐e乐彩下载抑制了Ag刺激的嗜碱性粒细胞
我们还研究了氟伐e乐彩下载对C57BL / 6J和129 / SVIMJ嗜碱性嗜碱性嗜碱性嗜碱性的影响。在IgE + Ag介导的活化前24小时培养24小时，在IgE + Ag介导的活化之前，IL-4，IL-6，IL-13，TNF和MCP-1产生，并抑制C57BL / 6J中的脱粒，但对129 / Svimj嗜碱性粒细胞（Fig. 4 ）。
图4。
氟伐e乐彩下载在C57BL / 6J中抑制IgE反应，但不是129 / Svimj嗜碱性粒细胞。如上所述，在氟伐e乐彩下载中培养来自所指示的小鼠菌株的嗜碱性粒细胞 Fig. 1然后在检测之前用AG激活（A）细胞内细胞因子或（B）表面CD63如上所述。数据是三次独立实验的±SEM，其三份完成并通过未配对分析 t 测试比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。对于每个独立的实验， n = 3. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001.
Fluvastatin选择性地改变了FcεRI信号通路
氟伐e乐彩下载的抑制作用可能与减少的FcεRI或C-kit表达有关。然而，浓度达到40μm的氟伐e乐彩下载治疗对于高达4d，对通过流式细胞术（数据未示出）测量的FcεRi或c-kit表面表达没有显着影响。因此，损失的受体表达似乎没有解释氟伐e乐彩下载效应。因此，我们研究了氟伐e乐彩下载如何影响FCεRI信号传导。
Ag交联后，SRC家族酪氨酸激酶Fyn和Lyn以及酪氨酸激酶Syk被招募到FcεRi（17）。氟伐e乐彩下载对C57BL / 6J BMMCS中的Fyn，Lyn或Syk表达没有影响（ 图5A ）。
图5。
Fluvastatin抑制FC.εRI signaling. (A）如所述，在DMSO或Fluvastatin中培养C57BL / 6BMMCs Fig. 1然后对Western Blotting进行Western印迹以检测Syk，Lyn或Fyn。 （B) BMMCs from the indicated strains were cultured for 24 h with IgE plus DMSO or fluvastatin (10 μM）在Ag介导的激活5分钟之前，通过蛋白质印迹分析以检测所示的总和磷酸化的蛋白质。黑线表示图像的部分连接。数据是手段 ± SEM analyzed by unpaired t 测试（a）九个样品和（b）三个独立实验。 *p < 0.05.
在FCεRI顶端酪氨酸激酶的下游，激活了许多信令途径。氟伐e乐彩下载抑制AKT和ERK磷酸化（图5B.）在C57BL / 6J中，但不是129 / SVIMJ BMCS。相反，JNK或P38磷酸化未受影响（图5B.）。总之，这些数据表明了氟伐e乐彩下载治疗的选择性抑制作用，从FcεRi处于顶部和远端作用。
129 / SVIMJ抗性与氟伐e乐彩下载介导的HMGCR诱导相关
虽然C57BL / 6J和129 / SVIMJ菌株具有显着的遗传变异性，但氟伐e乐彩下载靶HMGCR均报告在杰克逊实验室缺陷遗址（http://phenome.jax.org）在这些菌株之间缺乏编码多态性。我们通过从这些菌株测序MC HMGCR mRNA（数据未显示）来确认这一点。然而，编码变异性只是实现耐药性的一种方法。我们证明，氟伐e乐彩下载治疗后129 / SVIMJ BMMCs增加了HMGCR mRNA表达2.5倍，而C57BL / 6J BMMC显示表达没有变化（图6A）。此外，这种增加的表达似乎在功能上显着。如图所示 图6B.，氟伐e乐彩下载治疗在C57BL / 6JBMCS中减少了细胞胆固醇水平〜60％，而129 / SVIMJ BMMC不受影响。最后，我们发现，通过将HMGCR的异戊二烯化事件与GGTI-286±FPTIII（pMGC（）通过阻断HMGCR下游的异戊二烯化事件，可以抑制FCεRI介导的IL-6产生。图6C.）。因此，129 / SVIMJ背景响应于异戊二烯封闭，表明耐药性在于该步骤。这些数据集体支持HMGCR感应在129 / SVIMJ MCS中产生耐药性的假设。
图6。
129 / SVIMJ MCS表现出氟伐e乐彩下载诱导的HMGCR上调与耐药性相关。 （A）用DMSO或Fluvastatin（40μm）培养BMMCs 5小时。通过定量实时PCR分析HMGCR表达的总RNA。所示的数据来自两个独立实验中的一个，每个人口每次通过未配对分析 t 测试比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。 （B）用DMSO或氟瓦斯汀（10μm）培养BMCS 24小时。通过质谱分析裂解物的胆固醇存在。显示的数据是通过配对分析的三个样本的方法和SEM t 测试，将样品与氟伐e乐彩下载与车辆进行比较。 （C) 129/SvImJ BMMCs were cultured for 24 h with IgE plus the indicated inhibitors (20 μm）或fluvastatin（10μM), then activated for 16 h with Ag before ELISA analysis of supernatants. Data are from three independent experiments done in triplicate and analyzed by unpaired t 测试比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。 *p < 0.05, **p < 0.01, ****p < 0.0001.
氟伐e乐彩下载在C57BL / 6J中抑制被动全身性过敏性，但不是129 / SVIMJ小鼠
我们接下来使用了MC依赖被动系统过敏性（PSA）模型来评估氟伐e乐彩下载敏感性对C57BL / 6J和129 / SVIMJ小鼠的功能相关性。在本文中，我们表明氟伐e乐彩下载预处理显着减轻了C57BL / 6J小鼠中的核心体温损失，但对129 / SVIMJ背景没有影响（图7A）。来自这些小鼠的血浆MIP-1α水平表现出相同的趋势，在C57BL / 6J中观察到氟伐e乐彩下载介导的抑制，但不是129 / SVIMJ小鼠（图7B.）。这些数据显示，氟伐e乐彩下载抑制了MC依赖性过敏性的早期和晚期阶段，并且遗传背景可以大大改变药物反应。
图7。
氟伐e乐彩下载在C57BL / 6J中抑制PSA，但不是129 / SVIMJ小鼠。 （A 和 B）从所述指定菌株的小鼠如上所述进行PSA。通过ELISA分析了MIP-1α水平的血浆。 （C）用DMSO或氟瓦斯汀注射小鼠，如（a）中所述，然后用8mg组胺攻击。记录核心体温的变化。 （a和c） n = 5来自两个独立实验。 （b）数据是来自两个独立实验的±SEM。所有数据都通过未配对进行分析 t 测试比较氟伐e乐彩下载和DMSO（对照） - 治疗组。 **p < 0.01, ****p < 0.0001.
除了抑制MC脱粒外，氟伐e乐彩下载还可以抑制对组胺的血管反应。然而，我们表明氟伐e乐彩下载在组胺给药前的预处理不抑制过敏反应（图7C.）。因此，我们得出结论，氟伐e乐彩下载效应主要是由于MC抑制，而不是对脉管系统的影响。
对氟伐e乐彩下载的可变响应性在初级人体MCS中是一致的
鉴于小鼠菌株中氟瓦斯汀反应的缺陷变异，我们评估了来自八个健康科目的原发性人体皮肤MCS。有趣的是，我们发现氟伐e乐彩下载反应的巨大变异（Fig. 8）。在调查TNF和MCP-1生产时，我们注意到细胞因子生产中的相对降低<20% to >80％。这些数据表明，氟伐e乐彩下载可以显着钝化人体MCS中的IgE介导的活化，但遗传变异可能会影响药物反应性的程度。
图8。
人类MCS显示对氟伐e乐彩下载的各种反应。如八个受试者的人体皮肤MCS用DMSO或Fluvastatin培养如下 图。1A。 AG刺激后十六小时，分析培养上清液用于TNF的存在（A）或MCP-1（B）通过ELISA。散点图显示每个受试者的DMSO控制的归一折叠。在每个受试者中分析每个上清液。数据是指通过配对分析的±SEM t 用氟伐e乐彩下载治疗进行测试。 **p < 0.01, ****p < 0.0001.
讨论
e乐彩下载类药物最为人知，以其降脂效应而闻名，并且广泛规定以防止CVD。然而，几种临床试验表明，e乐彩下载类药物的抗炎效果是重要的，与他们对脂质的影响分开（在REF中审查。 7）。这些药物对MCS具有抗脂肪效应。据报道，Lovastatin和Fluvastatin抑制Rige介导的大鼠MC系列RBL-2H3中的脱粒（2）。此外，已经证明了Cerivastatin和阿托伐e乐彩下载在人嗜碱粒细胞中抑制生长和IgE介导的组胺释放（18）。我们的作品表明，一系列e乐彩下载类药物抑制了来自MCS和嗜碱性粒细胞的IgE诱导的细胞因子产生，具有不同程度的功效。有一些例外：普伐e乐彩下载略微增强细胞因子生产，阿托伐e乐彩下载没有显着影响。普伐e乐彩下载比“亲脂性”辛伐e乐彩下载，洛伐e乐彩下载和氟伐e乐彩下载更亲水（19）。然而，最亲脂的e乐彩下载类药物，洛伐e乐彩下载和辛伐e乐彩下载（20），在我们的测定中并不是最抑制的。有趣的是，氟伐e乐彩下载的抑制能力没有延伸到IL-10，被广泛被认为是抗炎细胞因子（21, 22 ）。
氟伐e乐彩下载的影响用MVA预处理逆转，确认甲醛途径的靶向特异性。我们的数据表明，天竺葵转移步骤至关重要。使用Squalene Synthase抑制剂Za的研究支持这些数据（23）尽管抑制胆固醇合成，但尚未改变IgE诱导的细胞因子产生。后一种结果表明，氟伐e乐彩下载的影响不是由于含胆固醇的脂质筏的大规模变化。在一起，这些数据争辩说，天竺葵烷基化对IgE介导的细胞因子产生具有最大的影响，并提出该途径作为控制MC响应的潜在目标。
马克 S在IgE介导的炎症中以其作用而闻名。哮喘和过敏研究支持e乐彩下载类药物在MC相关疾病中的广泛影响。氟伐e乐彩下载在过敏性哮喘患者中抑制了PBMC增殖和炎症反应（24）。此外，阿托伐e乐彩下载与吸入的皮质类固醇相结合，改善了Atopic哮喘的肺功能和气道炎症（25）。这些和其他研究导致了e乐彩下载类药物对哮喘管理有益的结论（26）。从人和动物研究提出了细胞和分子机制。e乐彩下载类药物可以通过减少单核细胞的IFN-γ诱导的MHC II表达来抑制T细胞活化（27）。 TATIN治疗也抑制了T细胞活化，增殖和迁移（24）。除了它们对免疫细胞的影响外，已显示e乐彩下载类药物来抑制支气管壁重塑（28 ）。
小鼠模型还支持e乐彩下载类药物治疗的理由。辛伐e乐彩下载在鼠模型中抑制了气道高反应性（29）。这部分是由于抑制T细胞产生的IL-4和IL-5（30）。最近，Kim等人。 （31）显示辛伐e乐彩下载在MC无关的气道高反应模型中降低了胚芽特异性IgE水平，巨噬细胞，中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的数量。此外，辛伐e乐彩下载还减少了硫代糖酸遗传诱导的腹膜炎症（32其中偏移浸润是中性粒细胞。
无源过敏反应模型不需要AG处理/呈递或T和B细胞的作用。在重点关注MC和脉管系统的同时，该测定表明，AG挑战前的氟伐e乐彩下载治疗显着降低了C57BL / 6J小鼠中的过敏反应性的严重程度。为了排除氟瓦斯汀主要抑制组胺的血管反应，我们用氟伐e乐彩下载预处理小鼠并通过注射组胺，氟伐e乐彩下载没有效果的条件绕过MC响应。这些数据支持氟伐e乐彩下载直接抑制体内MCS的理论，并支持e乐彩下载类药物作为MC相关疾病的治疗。
招募并激活IgE受体，Syk，Fyn和Lyn的下游。 Lyl主要是一个负调节因子，如Lyn缺陷的小鼠所述（33）。我们进一步显示氟伐e乐彩下载在C57BL / 6J中抑制AKT和ERK磷酸化，但不是129 / SVIMJ BMCS。这些是MC反应对IgE的关键调节因子，因此它们的集体抑制可以逻辑地解释细胞因子产生和过敏反应。
对C57BL / 6J和129 / SVIMJ MCS之间的STATINS的变量响应与我们组的先前研究一致。我们发现来自BALB / CJ背景的MC前体耐用于IL-10（34）129 / SVIMJ BMMCs对TGFβI介导的抑制（9）。因此，有趣的是注意，129 / SVIMJ，BALB / CJ和A / J是抗氟伐肽的抗性。因为C57BL / 6J是Th1-Prone和129 / Svimj，Balb / C和A / J是Th2-易发的小鼠，所以简单的结论是遗留遗迹，遗留到强Th1或Th2显影具有耐药性的相关多态性。然而，重要的是要注意，这些小鼠与T细胞或炎症表型无关的遗传变异。这些观察结果支持更深入的调查解释该药因效果的机制。
因为e乐彩下载类药物靶向HMGCR，我们最初假设C57BL / 6J和129 / SVIMJ菌株之间的遗传变异是菌株之间的HMGCR表达的多态性或稳态变化。相反，我们发现129 / SVIMJ MCS在氟伐e乐彩下载治疗后增加HMGCR表达，其与抗氟伐e乐彩下载介导的细胞胆固醇的抗性相关。重要的是，他人已经注意到e乐彩下载类药物诱导的HMGCR上调。例如，ness和同事（35）在食用阿托伐e乐彩下载的大鼠中发现HMGCR水平显着增加。最后，GGTI在129 / SVIMJ MCS中抑制了FCεRI介导的IL-6产生，证明可以通过靶向HMGCR之后的酶促步骤来抑制这些细胞。因此，我们提出增加的HMGCR在129 / SVIMJ小鼠中至少部分地负责氟伐肽抗性。
重要的是说明氟伐e乐彩下载抵抗的其他解释是可能的，并且需要进一步研究。患者患者的响应性很大，可能是因为几种遗传差异（36）。临床研究主要集中在细胞色素P450酶多态性上，脂质代谢基因脂蛋白E和B，胆甾醇酯转移蛋白和LDL受体（37）。例如，P450亚基CYP2C9是氟伐e乐彩下载代谢的主要途径（38）。它可能是CYP2C9基因的变体也有助于氟伐肽抗性。然而，鼠标CYP2C9 Orthologs CYP2C65 / 66在杰克逊实验室的苯群数据库上的C57BL / 6J和129 / SVIMJ菌株之间没有编码区域多态性。虽然CYP2C9多态性可能无法解释我们的鼠数据，但是人类供体之间的变化是未知的，而不是改变的HMGCR诱导相互排斥，并且应该进一步检查。
在测量FcεRI介导的细胞因子分泌时，在人MC培养物中抑制鼠MCs中氟伐e乐彩下载反应性的变异性。尽管需要大量的捐助者来证实这些发现，但这些数据表明了e乐彩下载类药物用于治疗MC相关疾病的可能效用，还可以预期的固有变异性。e乐彩下载类诱导的HMGCR表达可以用于筛选e乐彩下载类响应性。了解e乐彩下载类药物如何改变IgE介导的信号传导，以及遗传背景的重要性，可以证明是临床上有用的。目前，对我们的数据的简单解释是在Th2-Prone个人之间的效率可能不那么有效。我们的数据还表明，甘油烷基转移抑制剂可能治疗上有用，特别是在抗汀类药物群体中。然而，鉴于胆固醇合成级联的复杂性，有必要进一步研究e乐彩下载类介导的MC抑制和多态性之间的相关性，并可以为新疗法提供见解。
披露
作者没有财务利益冲突。
致谢
我们感谢Daniel Conrad博士进行了许多有关此稿件的有用对话。
脚注
该工作得到了国家卫生研究所（授予1R01ai101153和2R01ai059638至JJR;授予CEC的1R01 AI095494和CEC;并授予NH1C06-RR17393至弗吉尼亚联邦翻新的NH1C06-RR17393）和经验丰富Merit综述I BX001792和研究职业科学家奖13F-RCS-002至CEC）。服务（VCU Limidomics / Metabolomics核心设施）和支持研究项目的产品是部分由VCU Massey Cancer Center（共享和支持）产生的，并提供国家康复国家癌症研究所癌症中心支持赠款P30 CA016059的资金。
本文的在线版包含 补充材料.
本文中使用的缩写：
- BMCC.
- 骨髓衍生的MC
- CRPMI.
- RPMI 1640培养基补充了10％FCS，丙酮酸钠，青霉素和链霉素
- CVD.
- 心血管疾病
- DNP-HSA.
- DNP偶联人血清白蛋白
- FPTIII.
- 法呢基化转移酶抑制剂III
- GGTI-286.
- 香菜烷基转移酶抑制剂-286
- HMGCR.
- 3-羟基-3-甲基戊芳基辛还原酶
- 马克
- 桅杆细胞
- MVA.
- 甲戊酸酸
- PSA.
- 被动系统性过敏反应
- SCF.
- 干细胞因子
- ZA.
- Zaragozic acid A.
- 已收到 2015年8月28日。
- 公认 2015年12月7日。
- 版权© 2016 by The 美国免疫学家协会, Inc.
